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VHH納米抗體純化應用案例
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應用描述
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簡介
納米抗體（Nanobody, Nbs）是由比利時科學家于1993年在自然雜志中首次報道，是駱駝科動物(駱駝，大羊駝，羊駝及其近親物種)缺失輕鏈的天然重鏈抗體的可變區（VHH）組成的單域抗體，該抗體只包含一個重鏈可變區（VHH）和兩個常規的CH2與CH3區，VHH晶體為2.5nm，長4nm，分子量只有15KD，內部存在二硫鍵，且表面有大量親水殘基，對熱和PH值有較強的抵抗力，被稱為“生物導彈”的治療性抗體藥物。
納米抗體（Nanobody）與傳統抗體相比較，在結構上存在較大差異，所以其特性也表現不一樣。納米抗體具有相對分子質量小、人源化簡單、親和力高、穩定性高、可微生物表達、免疫原性低、穿透力強、可溶性好等優勢。使其在基礎醫學研究以及疾病診斷和治療方面具有廣闊的應用前景。
純化工藝：
與傳統的lgG相比，與駱駝發現的單鏈抗體（HCAb）缺少輕鏈和重鏈CH1,只含有CH2、CH3和可變區。HCAb抗原綁定部分由重鏈可變區構成，通過對其組裝改造，該雙特異性的納米抗體的相對分子質量為22~30 k 之間 。
納微采用兩步離子純化方法，陰離子流穿+陽離子結合模式，最終純度達到95%以上，收率達到90%以上。
結果
經第一步NanoGel™-50Q流穿模式純化后，從SDS-PAGE上分析，純度提高至80%左右，26k左右的目的條帶明顯；第二步NanoGel™-50SP結合模式純化后，上下雜帶基本去除，純度提高至95%以上。
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